Тест-система "КАПРИПОКС" для выявления генома каприпоксвирусов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Тест-система "КАПРИПОКС" для выявления генома каприпоксвирусов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

ФГУ ВНИИЗЖ, Россия


Общие сведения:

Тест-система "КАПРИПОКС" рассчитана на проведение 50 анализов (включая контроли). В состав тест-системы входят следующие компоненты:

№1 готовая ПЦР-смесь, объем 0,5500 см3 - 2 пробирки;
№2 фермент Taq ДНК-полимераза, объем 0,0125 см3 - 1 пробирка;
№3 отрицательный контроль, объем 0,1000 см3 - 1 пробирка;
№4 положительный контроль, объем 0,1000 см3 - 1 пробирка.

Тест-система не содержит реагентов для выделения ДНК.

По внешнему виду положительный контроль, отрицательный контроль, фермент Taq ДНК-полимераза и готовая ПЦР-смесь представляют собой прозрачную бесцветную жидкость.
Компоненты тест-системы расфасованы в пластиковые пробирки, соответствующего объема, с завинчивающимися крышками.
На пробирки с компонентами наклеены этикетки с указанием: наименования компонента, его номера и объема в пробирке.
Этикетированные пробирки в количестве, указанном в п.2, упакованы в полиэтиленовые пакеты с замком или коробки картонные, или пенополистирольные с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих неподвижность и целостность пробирок.
В полиэтиленовые пакеты с замком тест-система упакована следующим образом:
- Две пробирки №1 готовая ПЦР-смесь, пробирка №2 фермент Taq ДНК-полимераза и пробирка №3 отрицательный контроль упакованы в полиэтиленовый пакет с замком соответствующего размера.
- Пробирка №4 положительный контроль упакована в отдельный полиэтиленовый пакет с замком.
На пакеты наклеена этикетка с указанием: перечня и количества компонентов тест-системы, номера серии тест-системы, дата изготовления (мес, год), срока годности (мес, год), условий хранения, надпись "Для ветеринарного применения".

Срок годности тест-системы 6 месяцев от даты изготовления. Запрещено использовать тест-систему по истечении срока годности.
Хранение набора осуществляется при температуре от -18С до -20С, в защищенном от света месте.
При нарушении целостности и укупорки пробирок, изменении цвета компонентов, наличии посторонних примесей, при отсутствии этикеток, а также в случае истечения срока годности, компоненты тест-системы выбраковывают. Реактивы утилизируют в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемилогические требования к обращению с медицинскими отходами".

Принцип реакции:

Процесс обнаружения генома каприпоксвирусов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) включает выделение ДНК из биологического материала и проведении амплификации полученной ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени.
Особенность ПЦР-РВ - возможность регистрации результата ПЦР в процессе реакции, в каждый момент времени. Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют ДНК-зонд, помеченный флюоресцентным красителем FAM, который комплементарен специфическому участку генома каприпоксвирусов. К зонду также присоединен гаситель флюоресценции. В ходе ПЦР происходит разрушение зонда, разъединение флюоресцентной метки и гасителя, что приводит к появлению свечения. Амплификатор соответствующей марки регистрирует интенсивность свечения, в результате чего исследователь может узнать о результатах реакции без необходимости проведения электрофореза.

Порядок применения:

Тест-система предназначена для выявления генома каприпоксвирусов в образцах выделенной из биологического материала ДНК (соскобы кожи, сыворотка, цельная кровь, носовые смывы и др.) методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Транспортирование и хранение биоматериала для исследования.
Материалы должны доставляться в лабораторию в течение 24 часов, при температуре от 2С до 8С. Допускается хранение материала при температуре от -16С до -20С в течение 7 дней, при температуре от -68С до -72С в течение длительного времени.
Возможно лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
Выделение ДНК из биоматериала проводят любым доступным методом.

Организация работы лаборатории должна соответствовать МУ 1.3.2569-09.

Для проведения исследования на требуемое количество образцов (в т.ч. на образцы положительного и отрицательного контролей) в отдельной пробирке объединяют готовую ПЦР смесь (пробирка №1) и фермент Taq ДНК-полимеразу (пробирка №2). Реактивы вносят в количестве и последовательности, согласно табл. 1. Во время составления смеси ферменты следует держать на льду или на охлаждающей подставке.

Таблица 1. Состав и порядок сбора реакционной смеси
 Этап
Реактив 
Номер пробирки  Количество на 1 пробу (мкл)  Количество на n проб 
 1  Готовая ПЦР-смесь     №1     20     20 х (n+1)
 2  Фермент Taq ДНК-полимераза     №2     0,25     0,25 х (n+1)

Смесь перемешивают на шейкере в течение 5-7 секунд, после чего центрифугируют в течение 3-5 секунд при 1000 об/мин. и раскапывают по 20 мкл в стерильные пробирки. Затем, в эти же пробирки добавляют по 5 мкл предварительно выделенной ДНК: соответствующих анализируемых образцов, отрицательных контрольных образцов (отрицательный контроль выделения и отрицательный контроль ПЦР, поставляемый с тест-системой "КАПРИПОКС"), а также положительных контрольных образцов (положительный контроль выделения (если имеется) и положительный контроль ПЦР, поставляемый с тест-системой "КАПРИПОКС"). Пробирки закрывают и помещают в амплификатор для проведения ПЦР в режиме реального времени с возможностью детекции сигнала красителя FAM.
Программирование амплификатора осуществляется согласно инструкции производителя. Режим термического профиля должен соответствовать показателям, описанным в табл.2.

Таблица 2. Режим термического профиля.
 Этап
 Температура, С     Время, сек.   Измерение флуресценции    Количество циклов амплификации 
 Удержание температуры
 95
 600
 -
    1
 Амплификация со считыванием
 95
 15
 -
    40
 Амплификация со считыванием
 60
 60
 FAM
    40

Учет и интерпретация результатов:
Результаты интерпретируются на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, что соответствует наличию или отсутствию на канале FAM значения порогового цикла амплификации (Ct), в соответствующей графе в таблице результатов, отображаемой амплификатором.
Если регистрируемое значение Ct меньше/равно 35, результат обнаружения генома каприпоксвирусов считается положительным. 
Если регистрируемое значение Ct больше 35, результат обнаружения генома каприпоксвирусов считается отрицательным.

 Результат считается достоверным только в случае, если:
- для положительного контроля амплификатором на канале FAM регистрирует значение порогового цикла амплификации - Ct меньше/равно 33;
- для отрицательного контроля амплификатором не регистрирует какого-либо значений порогового цикла на канале FAM.

Результат считается недостоверным (не подлежит учету) в случае, если:
- для образца положительного контроля регистрируется значение Ct больше 33;
- для образца отрицательного контроля регистрируется какое-либо значение Ct.



Для получения более подробной информации о препарате, позвоните по одному из телефонов:

8 (495) 150-08-74.

Весь перечень и инструкции ветпрепаратов можно посмотреть в каталоге продукции на нашем сайте. В отношении цены, а также о возможности покупки Вас с удовольствием проинформируют наши менеджеры.

Понравился сайт? Поделись с друзьями!
© 2014 ООО "БИОВЕТ". - Компания ООО "БИОВЕТ" - Оптовые поставки ветеринарных препаратов. Все права защищены.
ООО «БИОВЕТ»
111622, Москва, ул. Большая Косинская, д. 27, оф. 301
Телефон: 8 (495) 150-08-74
e-mail: biovet@bk.ru
seo-partner
ch