Набор для определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
Набор для определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
ФГУ ВНИИЗЖ, РоссияСостав и форма выпуска:
В состав набора входят следующие компоненты.
Иммуноспецифические компоненты: очищенный антиген вируса ССЯ 76, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу ССЯ 76 (положительный контроль), цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 - 1 флакон; нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ССЯ 76, цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, лиофилизированный, сухая пористая масса белого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или концентрат раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 3,0 мл - 1 флакон, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии).
Неспецифические компоненты: концентрат буферного раствора для разведения испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата, бесцветная прозрачная жидкость, 32, 5 мл - 1 флакон; концентрат раствора для межэтапной промывки, бесцветная прозрачная жидкость, 130см - 1 флакон; раствор субстрата АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода - зеленоватая прозрачная жидкость, 25,0 - 1 флакон; концентрированный 5-кратный - 5 % раствор додецилсульфата натрия, бесцветная прозрачная жидкость, 5 - 1 флакон. Допускается образование осадка белого цвета при хранении в холодильнике. Набор рассчитан на анализ 92 проб сывороток крови кур на каждом планшете. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала.
Фармакологические свойства:
Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген-антитело, образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале.
Показания:
Для определения специфических гуморальных антител против вируса синдрома снижения яйценоскости 76 (ССЯ 76) в сыворотках крови чур иммуноферментным методом (ИФА) при исследовании в одном разведении.
Дозы и способ применения:
Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл, до 0,2 мл и до 1 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5) °С, бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА.
Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет).
Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл.
Внимание!
Если при хранении 5-кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 °С до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой цепью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ССЯ 76. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки А3 - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывавают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного .
Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (5) к значению оптической плотности положительного контроля (Р), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,45 - 0,8. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют. Расчет S/P отношения: S/P = (Значение ОП испыт. сыв-ки - ср. значение ОП отрицательного контроля)/(Ср. значение полож. контроля - ср. значение отрицательного контроля) Полученные значения 5/Р позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные.
Пробы сывороток со значениями S/Р ниже или равными 0,195 считаются отрицательными, если больше 0,337 - положительными. Расчет титра антител. Титр антител в исследуемых пробах сыворотки крови, разведенных 1 : 400, вычисляют по следующей формуле: Титр = аntilg (2,367 (lg S/P) + 4,162). Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества положительных проб к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к синдрому снижения яйценоскости при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови получены положительные результаты). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ССЯ 76. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ССЯ 76 является осно ванием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.
Особые указания:
Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды под краном. Использованные планшеты обеззараживают 3 % раствором хлорной извести или другими сильными окислителями. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора. Флаконы и планшеты без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета, наличием посторонних примесей подлежат выбраковке и утилизации.
Условия хранения:
В сухом защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Не допускается замораживание компонентов! Срок годности - 12 месяцев.
Для получения более подробной информации о препарате, позвоните по одному из телефонов:
8 (495) 150-08-74.
